فصل الدنا

× نضيف العينة في انبوب نضيف عليها انزيم
SDS- proteinase K

الغرض منه ترسيب المكونات حول شريط الـDNA بدون التأثير على الشريط نفسه
..




× نضيف المحلول المنظم للعينة ونضعها في انبوب الطرد المركزي ..وهذا شكلها : 




×
نخلطها بواسطة جهاز الـVortex لمدة 10 دقائق..

وهذا الـVortex shaker:


× نضعها في جهاز الطرد المركزي لمدة 10 دقائق..وهذا هو:




×
نخرجها من الجهاز وسينتج 3 طبقات.. راسب-ورائق.. نتخلص من الرائق ونأخذ
الراسب(الراسب يحوي الشريط النووي)

× نضيف على الراسب مايلي: EDTA +10%SDS +
proteinase K.

× نحفظ العينة في
حمام مائي عند درجة حرارة 37 ºم ليلة كاملة .. تحت التحريك المستمر
..
ويقوم الجهاز بتحريك العينة وحفظ حرارتها ..
وهذا نموذج من الجهاز:



×
نضيف الفينول ونرج العينة بجهاز الـVortex مره اخرى لمدة 10 دقائق..


× نضع العينة بجهاز الطرد المركزي –أيضاً مره أخرى- لمدة 10 دقائق ثم نحصل على
طبقتين..

× نأخذ الرائق ونضيف
لها الكلروفورم.. ثم طرد مركزي لمدة 5 دقائق..ثم ناخذ الراسب الناتج..


× نضيف للراسب الايثانول ..ثم طرد
مركزي..نتخلص من الرائق.. وسنلاحظ شريط الـ DNA على جدار الانوب..


× نقلب الانبوب ليجف الـ DNA ثم نعيد
تذويبه بإضافة محلول الـ EDTA

وهذا شكله النهائي..


\ مثل ماهو ملاحظ واضح بالعين المجرده ..لكن.. لايجي في بالكم هذا شريطين ملتفين من
الـDNA ..

بل هذا بوليمر –او جزئ ضخم جداً- ملتف بعدّة
مكونــات \