قراءة تسلسل المادة الوراثية ( نظريا)
قراءة تسلسل المادة الوراثية ( نظريا) .. 
مكتشف هذه الطريقة عالم بيرطاني يدعى سانجر 
وتسمي chain termination method طريقة قطع السلسلة ، و مبدأها العلمي بسيط
جدا و لكي نفهم المبدا ركزوا في التالي :
اللبنات الأساسية لبناء المتسلسلة الوراثية Sequence عبارة عن
A
C
G
T
و لنأخذ نظرة عن التركيب الجزيئي لهذه القواعد
في الحالة الطبيعية DnTPS تدعم عملية التوصيل elongation
و لكن في الحالة الثانية بعد نزع ذرة الأوكسجين في DDnTPS فأنها لا تدعم
التوصيل ببعض و يحصل ايقاف لتركيبة السلسلة . طيب حط في الحسبان
فلو استخدمنا تفاعل PCR بالظروف التالية
A C T عبارة عن DnTPS و لكن اضفنا معها G على أنها DDnTP لا تدعم الارتباط
أي لن يرتبط بعدها اي قاعدة و ستوقف التفاعل على التمبلت او خيط DNA
الموجود
التجربة :
المواد :
منتج PCR قد سبط عزله بطول معين 100 او 300 او 1000 قاعدة متسلسلة bp
TaqPol انزيم البلمرة
بفرز او محاليل منظمة للتفاعل
قواعد سليمة من ACT
قاعدة منقوصة من G
برايمر أو بادئة خاصة بالمنتج
نعمل الماستر مكس و نحطها في جهاز الدوران الحراري Thermal Cycler
سيظهر لدينا منتج بأطوال متباينة يتوقف عند كل قاعد G
كما في الصورة
سؤال لو عملنا فصل كهربي على الجل أيها سيعبر اسرع ؟
الأقل وزنا أي الأقرب في السلسلة
اذن لو قمنا بأربع تفاعلات في كل تفاعل نغير قاعدة ، سنتج لنا منتجات PCR
مفصوله بأصول معينة و منها نملأ الفراغ
هذا للطريقة التقليدية
و اما بالنسبة للطريقة الآليه مثل جهاز ABI prism
فيتم دمج الأصباغ مع بعضها و كل مكان يتوقف فورا عند ارتباط قاعدة DDnTPS و
لأن المخلوط أساسا
مكون من DnTPS و أيضا DDnTPS فأيها يرتبط يستمر و يتوقف التفاعل
تعليقات
إرسال تعليق